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R0011 的成分有哪些?是否和溴化乙錠(EtBr)有所不同?用該產品染色後的 RNA 的選殖(clone)效率如何?# R0011 的成分尚未公開。# R0011 不含溴化乙錠。萃取自聚丙烯醯胺凝膠(polyacrylamide gel)且經 RNA 染色溶液染色的 RNA 保持完整(指沒有觀察到任何降解),並且用這些萃取的RNA所製備的cDNA選殖(clone)效率良好。
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# R0007 的分子量標記大小如何?為了能在凝膠上成像,我們是否需要對該產品進行放射標記?small RNA 分子量標記 (#R0007) 含有總量約 6.4 ug RNA,該 RNA 是 5 種單股 RNA 所組成的混合物(分別含 20、30、40、50 和 100 個鹼基)。大致說來,每個片段的濃度約為 0.05 mg/ml (各片段的濃度略有不同)。如果您在聚丙烯醯胺凝膠電泳的一個上樣孔中加入 1 至 2 ul small RNA 分子量標記 (#R0007),RNA 條帶可通過溴化乙錠染色觀察到。在這種情況下,您不必使用放射性同位素對分子量標記進行標記。
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這種標記物 (R0007) 的濃度是多少?一個small RNA 分子量標記 (R0007) 中所含的 RNA 總量約為 6.4 ug,因此其濃度約為 0.2 mg/ml。small RNA 分子量標記 (R0007) 中含有 5 種單股 RNA,分別為 20、30、40、50 和 100 個鹼基。由於每種 RNA 的數量經過調整以在電泳時獲得良好的清晰度,故每種片段的濃度均略有不同。請確保這種 RNA 分子量標記不會用於定量分析。
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小麥胚芽體外蛋白表現系統(wheat germ in vitro expression system)可表現的蛋白最大長度是多少?該系統可成功表達 > 120 kDa 的蛋白質(即 SARS S protein)。雖然產量可能無法和分子量 <80Kd 的蛋白質一樣高,但我們能夠藉由使用更多細胞裂解液來滿足客戶的蛋白質總量要求,從而補足所需產量。
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什麼是小麥胚芽體外蛋白表現系統(wheat germ in vitro expression system)?日本愛媛大學 (Ehime University, Japan) 的 Yaeta Endo 教授開發出一種新的高效率且穩健的無細胞小麥胚芽蛋白質合成系統。通過徹底洗滌小麥胚芽可除去 RNA N-糖?? tritin 和其他抑制劑(如源自胚乳和表達抑制的硫堇、核糖核酸?、脫氧核糖核酸?和蛋白?)。採用小麥胚芽萃取物的體外表現系統不含抑制劑,加上經過最適化的表現載體具備高效力以及穩定的特色,因此能夠表達長度達到70-80 kDa的全長蛋白質。以下為與小麥胚芽體外表現系統相關的文獻:
1: Sawasaki T, Ogasawara T, Morishita R, Endo Y. A cell-free protein synthesis system for high-throughput proteomics.Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Nov 12;99(23):14652-7. Epub 2002 Oct 30.PMID: 12409616 [PubMed - indexed for MEDLINE]
2: Sawasaki T, Hasegawa Y, Tsuchimochi M, Kamura N, Ogasawara T, Kuroita T, Endo Y. A bilayer cell-free protein synthesis system for high-throughput screening of gene products.FEBS Lett. 2002 Mar 6;514(1):102-5.PMID: 11904190 [PubMed - indexed for MEDLINE]
3: Morita EH, Sawasaki T, Tanaka R, Endo Y, Kohno T. A wheat germ cell-free system is a novel way to screen protein folding and function.Protein Sci. 2003 Jun;12(6):1216-21.PMID: 12761392 [PubMed - in process]
4: Kigawa T, Yabuki T, Yoshida Y, Tsutsui M, Ito Y, Shibata T, Yokoyama S. Cell-free production and stable-isotope labeling of milligram quantities of proteins.FEBS Lett. 1999 Jan 8;442(1):15-9.PMID: 9923595 [PubMed - indexed for MEDLINE]
5: Madin K, Sawasaki T, Ogasawara T, Endo Y. A highly efficient and robust cell-free protein synthesis system prepared from wheat embryos: plants apparently contain a suicide system directed at ribosomes.Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 Jan 18;97(2):559-64.PMID: 10639118 [PubMed - indexed for MEDLINE]
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適當的免疫動物是什麼?不同於一般傳統使用的Balb/c小鼠,我們單株抗體生產使用一種高免疫性之小鼠品種,若客戶有特殊需求需以倉鼠與大鼠免疫, 請與我們連繫。
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採用哪些分析方法驗證抗體有效性?針對所提供的蛋白質,我們採用 ELISA 和Western Blot技術篩選融合瘤。如果您需要其他效能分析結果,您需要向我們提供相關材料。我們將為您進行測試。
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如果蛋白質是不水溶性蛋白呢?我們將盡力溶解不水溶蛋白,包括使用 1.5% 肌胺酸 (sarcosin)。我們也會嘗試以細菌包涵體 (inclusion body) 所保留之不水溶性蛋白質進行注射以產生抗體。
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免疫所要求的最低多胜?長度是多少?長度至少要20 個胺基酸以上。
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能否針對某個特定的多胜?序列生產抗體,所生產的抗體能否與天然蛋白質中的多胜?序列反應?如果採用結合胜? (conjugated peptide) 使小鼠產生免疫,我們只保證產生的抗體能夠辨識該段合成胜?,但我們不保證在其可於天然蛋白質中辨識出該段胜?序列,原因是合成胜?可能不具有正確的折疊結構。
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抗體同種型 (isotype) 有哪些?我們最常製備的是 IgG2a 和 IgG2b 抗體。
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客戶是否能提供細胞裂解液以供篩選?是的,有這項服務可供選擇。亞諾法無法保證抗體將能夠識別出細胞裂解液,原因在於:(1) 客戶所提供的裂解液品質具有不確定性,且 (2) 於細菌中表現之抗原可能和在哺乳動物細胞裂解液中表現的蛋白質具有完全不同的構型。
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亞諾法是否能提供表達載體?是的。如可獲得 cDNA 或質體 DNA,亞諾法能夠免費提供選殖(clone)載體;或是由亞諾法進行次選殖(subcloning)法,此時需要額外支付 200 美元。
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客戶是否會收到產生抗體的clone?是的,客戶會收到其要求開發的所有融合瘤clone。標準客戶製備服務下,客戶將收到最多 5 個clone。如需要更多clone,則需要額外付費。
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亞諾法能幫助製備抗原嗎?如果您提供我們 cDNA,我們能將其次選殖(sub-clone)至我們的載體,並通過小麥胚芽體外蛋白表現系統進行蛋白表達。
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生產抗體需要多少抗原?如果抗原是胜?,結合前通常只要2 mg就足夠了(1 mg 用於 KLH,1 mg 用於 BSA)。如果抗原是蛋白質,一隻小鼠需要500μg,蛋白濃度在0.5-1 mg/ml通常便足夠。
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製備抗體時使用哪種抗原?亞諾法的免疫方法可針對天然蛋白質、重組蛋白質和胜?進行調整。不接受對人體健康有害的抗原。
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亞諾法的技術和Epictomics技術有什麼區別嗎?亞諾法在生產和篩選單株抗體時,使用的是來自全免疫庫的非融合抗體庫,而不是使用骨髓瘤融合(融合率<1%)。
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為什麼選擇兔單株抗體而不是小鼠單株抗體?與小鼠單株抗體相比,兔單株抗體具有更為廣泛的抗體多樣性、抗原性、親合力、特異性和適用性。
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可產生多少種獨特的抗體克隆?這取決於抗原的大小(如胜? vs. 蛋白質)和序列同源性(如人類vs.兔)。
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誰擁有相關兔單株抗體的銷售權和智慧財產權?客戶
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如果抗體製備沒有成功,需要支付多少費用?抗體製備費用是根據製備流程分期支付的,因此可最大限度地降低客戶的風險。
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兔單株抗體能否識別出不完全抗原 (hapten) 或磷酸化胜??是的。
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兔Fab抗體能否與G蛋白結合?是的。
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F(ab)2抗體能否與其他標記蛋白結合?是的,包括以下不同種類:Fc、同型Fc、生物素 (biotin)、鏈黴親和素(streptavidin)、辣根過氧化? (HRP)。
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客戶是否能獲得兔單株抗體的質體 cDNA。否。質體是亞諾法的專利技術。
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客戶是否能獲得兔單株抗體的抗體序列:是的。要獲得抗體序列,需要支付額外費用,但根據後續重組抗體生產的規模,該項費用可以減免。
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是否為客戶提供附加服務(IHC、抗體配對和擴增)?是的。
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KA0037 分析針對的是β-β同源二聚體形式還是僅針對β次單元?人類 S100B ELISA 試劑盒可測量血清、血漿(Heparin Plasma)和腦脊液樣本中的S100B總量。適用分析對象包括 S100 β次單元、S100 β-β和β-α二聚體。本試劑盒不會與 S100 A1、S100 P 和 S100 Z 蛋白質產生交叉反應。
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KA0020 能否檢測血清或肺灌洗液中的大鼠克拉拉細胞(Clara cell)分泌蛋白?我們還未在人類克拉拉細胞蛋白質ELISA中檢測大鼠樣本的交叉反應活性。可能可以檢測,但目前我們沒有相關證據。我們即將完成多項分析中的交叉反應性數據收集,其中包括克拉拉細胞蛋白質ELISA檢測。
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關於 KA0037 S100B Human ELISA試劑盒,我了解可以使用血漿或血清樣本,但目前並沒有詳細說明該選擇哪種抗凝血劑(EDTA或肝素)-有任何建議嗎?該項檢測適用於血清和血漿。我們不建議使用含有EDTA或檸檬酸的血漿樣本。
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我正在用 Pierce EZ-link activated HRP試劑盒將HRP和我的 IgG相結合。但我使用的結合效果不好。您能提供使用這種試劑盒時關於結合策略/效率的更多資訊嗎?正如您所說的那樣,我們使用的結合方法不是經由醛類結構。以下是我們的標記方法,供您參考。
另外,結合效率幾乎達到 100%,且結合收集率超過 90%。
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每個雜交瘤細胞株預計可獲得多少腹水?通常,我們從每隻Balb/c小鼠中可獲得5 ml腹水,每隻SCID小鼠則可獲得8-10 ml。客製化腹水服務是根據客戶所需腹水總量來決定使用的小鼠數量。不過,由於每個細胞株可能具有獨特的生長特徵,我們不能保證每個細胞株的收集率相同。然而如果需要一定數量的腹水,我們能藉由注射更多隻小鼠來滿足您的要求。
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如果要訂購腹水製備服務,客戶需要提供哪些材料?亞諾法希望客戶可以提供其融合瘤細胞株的培養基資訊和生長速率。如果客戶有融合瘤同種型鑑定 (isotyping) 的QC數據,我們也希望可以獲得此相關資訊。另一方面,我們也能應客戶要求為其進行同種型鑑定測試。
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為何內生性、未經轉染之細胞裂解液樣本沒有西方墨點法 (Western Blot) 訊號?內生性、未經轉染之細胞裂解液一般被當做對照組樣本,在進行西方墨點法時可用於比較生產之抗體對標靶蛋白的反應性。我們很難事先知道在未轉染細胞與轉染細胞中蛋白表現的精確數量。儘管如此,轉染細胞通常可大量表現標靶蛋白,因此對於進行抗體檢測而言更為可靠。未轉染細胞裂解液和轉染細胞裂解液應同時進行西方墨點法分析並獲得抗體的影像訊號,此外應同時考慮一抗及二抗濃度、呈色時間和暴露時間間隔等因素,以獲得最好的比較結果。
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如何支付款項?隨貨寄出的發票上將提供支付方法。以下支付方式均可接受:
‧ 信用卡
‧ 支票
‧ 電匯
我們不接受匯票或現金。
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請問貴公司的退貨/替換方案?如果您收到產品後發現任何缺失,請在收到產品後的10天內通知我們。我們將立即為您更換問題產品。如果您收到的產品在實驗中無效,您不需要把產品退給我們;不過我們需要您提供相關實驗數據,以便執行後續流程。請向我們索取問題排除表並填寫;我們將會確保您獲得我們專業團隊的全面性支持。
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